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本试剂盒适用于培养的细胞染色，可应用于荧光显微镜、激光共聚焦计或流式细胞仪检测。

7-AAD(7-amino-actinomycin D)是一种核酸染料，它不能通过正常质膜，随着细胞凋亡、细胞死亡过程，质膜对7-AAD的通透性逐渐增加，结合细胞凋亡中DNA的有控降解，在合适波长激发光的激发下可发出明亮的红色荧光，通过7-AAD标记DNA的强弱，将细胞分为三群：7-AAD强为死亡细胞，7-AAD弱是凋亡细胞，7-AAD-为正常活力细胞。7-AAD同PI有着相似的荧光特性，但其发射波谱较PI窄，对其他检测通道的干扰更小，在多色荧光分析中是PI的最佳替代品，可与Annexin V-EGFP/FITC/PE联合使用。

1. 微量试剂取用前请离心集液。
   
2. 7-AAD避光保存及使用。
   
3. 7-AAD为潜在致癌物，操作时请采取防护措施，穿防护服、戴手套等。
   
4. 本试剂盒适用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不以应低于1×10⁵，不推荐用于检测组织样本。

1. 悬浮细胞离心(2000rpm离心5min)收集；贴壁细胞用胰酶消化收集用PBS洗涤细胞二次(2000rpm离心5min)收集1～5×10⁵细胞；
   
2. 在50μL的1×Assays Buffer中加入5μL 7-AAD染液，混匀；
   
3. 收集细胞中加入上述7-AAD染液，混匀；室温、避光、反应5～15min；
   
4. 加入450μL的1×Assays Buffer悬浮细胞；
   
5. 请在1小时内，进行下述荧光显微镜或流式细胞仪的观察和检测。
   
   1. 荧光显微镜观察
      
      1. 滴一滴上述染色后的细胞悬液于载玻片上，并用盖玻片盖上细胞；
         
      2. 对于贴壁细胞来说，也可直接用盖玻片来培养细胞并诱导细胞凋亡；
         ① 将细胞于盖玻片上生长，用适当的凋亡诱导剂诱导细胞凋亡，并设立阴性对照组；
         ② 用PBS洗涤细胞两次；
         ③ 在50μL的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液，混匀；
         ④ 将上述溶液滴加于盖玻片表面，使长有细胞的盖玻片表面均匀覆盖；
         ⑤ 避光、室温反应5min。
         
      3. 将盖玻片倒置于载玻片上，于荧光显微镜下观察激发波长546nm，发射波长647nm，7-AAD荧光信号呈红色。
   2. 流式细胞仪分析
      用流式细胞仪检测，激发波长Ex=546nm;发射波长Em=647nm。7-AAD红色荧光建议使用FL3通道检测。